人 EGFR/ALK/ROS1/MET/KRAS/RET 基因突变检测试剂盒注册技术审评报告（2026年版）

一、产品概述

　　(一)产品主要组成成分

　　本试剂盒包括两个部分：RNA基因融合检测和DNA基因突变检测。

　　RNA基因融合检测组成成分包括LET反应条A(LETA)、LET逆转录液I、LET逆转录液II、LET逆转录酶、LET混合酶A和LET阳性对照A。LET逆转录液I、LET逆转录液II和LET逆转录酶用于样本 RNA逆转录成cDNA;LET反应条A(LETA)和LET混合酶A 用于样本cDNA扩增检测。PCR反应液已预先分装于PCR8 联管(LETA)中，8 联管内装有各自相应的 PCR反应液，RNA基因融合检测由①号管和⑤~⑧号管FAM信号指示，①号管和⑤~⑧号管VIC信号作为内标，扩增的是人类GUSB基因保守区段，用于指示RNA样本质量和质控实验是否异常，详见表1和表2。

　　DNA基因突变检测组成成分包括LET反应条B(LETB)、LET混合酶B 和LET阳性对照B。LET 反应条B(LET B)和LET混合酶B用于样本DNA扩增检测。PCR反应液已预先分装于PCR8 联管(LETB)中，8 联管内装有各自相应的PCR反应液，

　　DNA基因突变检测由①~③号管 FAM和 ROX信号及⑤号管ROX信号指示，①~③号管和⑤号管VIC信号作为内标，扩增的是EGFR、KRAS和BRAF基因保守区段，用于指示DNA样本质控实验是否异常，DNA样本质量由⑧号管FAM和ROX信号指示，详见表1和表3。

　　表1 试剂盒组成

试剂盒组分	主要组成成分	数量/装量
LET 反应条A(LET A)	引物、探针、Buffer、dNTPs	12条/ 35μL/孔
LET 反应条B(LET B)	引物、探针、Buffer、dNTPs	12条/ 35μL/孔
LET逆转录液I	引物、Buffer、dNTPs	280µL/管×1
LET逆转录液II	引物、Buffer、dNTPs	280µL/管×1
LET逆转录酶	逆转录酶	16μL/管×1
LET混合酶A	DNA聚合酶、UNG酶	45μL/管×1
LET混合酶B	DNA聚合酶、UNG酶	45μL/管×1
LET阳性对照A	细胞系RNA	65μL/管×1
LET阳性对照B	质粒DNA、野生型DNA	250μL/管×1

　　表2 LET 反应条A组成

管号	组成成分	检测目标	荧光信号
①	LET 反应液A1	ALK基因融合	FAM、VIC
⑤	LET 反应液A5	ROS1 基因融合	FAM、VIC
⑥	LET 反应液A6	ROS1 基因融合	FAM、VIC
⑦	LET 反应液A7	MET基因14号外显子跳跃突变	FAM、VIC
⑧	LET 反应液A8	RET基因融合	FAM、VIC

　　表3 LET 反应条B组成

管号	组成成分	检测目标	荧光信号
①	LET 反应液B1	EGFR基因突变	FAM、VIC、ROX
②	LET 反应液B2	EGFR基因突变	FAM、VIC、ROX
③	LET 反应液B3	EGFR基因突变	FAM、VIC、ROX
⑤	LET 反应液B5	KRAS基因突变	VIC、ROX
⑧	LET 反应液B8	外控	FAM、ROX

　　说明：不同批号试剂盒中各组分不可相互混用。

　　(二)产品预期用途

　　本试剂盒用于体外定性检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)样本DNA/RNA中人类EGFR、KRAS、ALK、ROS1、RET基因突变和MET基因14号外显子跳跃突变，具体突变位点信息详见产品说明书。其中EGFR基因19 号外显子缺失突变和L858R突变可用于盐酸厄洛替尼片和甲磺酸奥希替尼片的伴随诊断;EGFR基因T790M突变可用于甲磺酸奥希替尼片的伴随诊断;ALK基因融合和ROS1 基因融合可用于克唑替尼胶囊的伴随诊断;MET基因外显子 14跳跃突变可用于谷美替尼片和盐酸特泊替尼片的伴随诊断;KRAS基因 G12C 突变可用于枸橼酸戈来雷塞片和格索雷塞片的伴随诊断;RET基因融合可用于塞普替尼胶囊的伴随诊断。具体信息详见表4。

　　表4 伴随诊断用途的基因变异类型及相应的靶向药物

靶向药物	基因变异类型
盐酸厄洛替尼片	EGFR 基因19号外显子缺失突变和L858R突变
甲磺酸奥希替尼片	EGFR 基因19号外显子缺失突变、L858R 和T790M突变
克唑替尼胶囊	ALK基因融合和ROS1 基因融合
谷美替尼片	MET基因14号外显子跳跃突变
盐酸特泊替尼片（拓得康®)
枸橼酸戈来雷塞片	KRAS基因G12C突变
格索雷塞片
塞普替尼胶囊	RET基因融合

　　(三)产品包装规格

　　10测试/盒。

　　(四)产品检验原理

　　本试剂盒以NSCLCFFPE样本RNA和DNA为检测对象。

　　RNA检测是通过两步RT-qPCR方法对样本RNA中基因融合进行检测，均由FAM信号指示;RNA各检测管均含有扩增人类管家基因的检测试剂，用于监控样本 RNA质量和加入情况，均由VIC信号指示。

　　DNA检测是通过ADx-ARMS®技术对样本DNA中基因突变进行检测，由FAM和 ROX信号分别指示不同突变位点。ADx-ARMS®技术是针对突变位点设计特异的突变检测引物，PCR扩增时，由于该引物3'末端的碱基与突变型模板完全配对，引物延伸并扩增出突变模板;而与野生型模板由于不能完全配对，引物的延伸被阻断，野生型模板扩增被抑制，从而实现基因突变的检测。

　　本试剂盒PCR扩增反应系统同时含有UNG酶，可以选择性断裂含有dU的PCR片段中的尿嘧啶糖苷键，有效降低因PCR产物污染产生的假阳性。

二、临床前研究概述

　　(一)主要原材料

　　1.主要原材料的选择

　　主要原材料包括引物、探针、DNA聚合酶、逆转录酶、UNG酶和dNTP，这些主要原材料均为外购方式获得。

　　自行设计的引物、探针委托专业的合成公司合成，并经HPLC纯化获得;DNA聚合酶、逆转录酶、UNG酶和 dNTPs等均由有资质的原料供应商提供。通过功能性试验，申请人筛选出最佳原材料和供应商，同时制定了各主要原材料质量标准并检验合格。

　　2.企业参考品设置情况

　　申请人设计了完整的企业参考品，包括阴性参考品、阳性参考品、最低检测限参考品和精密度参考品，除了两支阴性参考品为大肠杆菌来源的核酸外，其他参考品均采用临床样本制备而成。

　　阳性参考品共 162支，包括试剂盒可检出所有融合类型不同融合含量和所有突变类型不同突变比例的 153支阳性参考品及9支双阳性参考品。阴性参考品共20支，9支为临床FFPE阴性RNA，9支为临床FFPE阴性DNA，另外2 支分别为非人基因组样本(大肠杆菌)的RNA和DNA。检测限参考品共51支，包括试剂盒可检出的所有融合/突变类型。精密度参考品共30支，包括阴性精密度参考品、不同突变比例的阳性精密度参考品。

　　产品同时设置了阳性对照和阴性对照，用于检测过程中试剂盒和仪器的质量控制。

　　(二)生产工艺及反应体系研究

　　申请人对该产品反应体系的研究包括PCR反应体积、逆转录体积、反应液各组分和酶液等使用量研究、核酸和cDNA用量研究、PCR扩增反应条件研究、循环数研究等。

　　通过功能性实验，确定了最佳的反应体系。申请人根据试剂盒中试剂和组件的主要生产工艺的研究结果，确定了最佳的生产工艺。

　　(三)分析性能评估

　　产品分析性能评估内容主要包括：准确度、精密度、分析特异性、最低检测限、核酸提取性能等研究。申请人提交了有

　　效运行的质量管理体系下生产的多批产品在适用机型上的性能评估资料。

　　准确度研究中，使用 3批成品试剂盒在适用机型上对企业和国家阳性参考品和阴性参考品进行检测，检测结果显示阳性参考品符合率、阴性参考品符合率均为100%。

　　精密度研究中，使用3批成品试剂盒在适用机型上对阴性参考品和阳性精密度参考品进行检测，评价本产品批内、批间、日内、日间、人员间、不同PCR仪器、不同地点和再现性精密度，结果显示检测结果符合率均为100%，检测变异系数均不大于5%。

　　最低检测限研究中，申请人使用不同核酸浓度和不同融合含量及不同突变比例的样本进行检测，采用95%(n=20)的阳性检出率作为标准，初步确定产品最低检测限。然后使用3批成品试剂盒在适用机型上对检测限参考品进行验证。最后使用3批成品试剂盒在适用机型上对与企业参考品不同的临床样本进行最低检测限的验证，结果满足说明书中声称。

　　分析特异性研究包含交叉反应研究和干扰研究，交叉反应研究包括序列相近和具有一定同源性的其他常见突变类型、NSCLC其他常见基因突变类型和非人类基因组基因。申请人使用 3批试剂盒对交叉反应样本进行检测，结果显示均无交叉反应。干扰试验结果显示，临床样本中可能存在的外源干扰物质(乙醇、二甲苯、蛋白酶 K、液体石蜡、大肠杆菌、酵母菌、福尔马林)、内源性干扰物质(血红蛋白、甘油三酯)和药物(紫杉醇、培美曲塞、吉西他滨、吉非替尼、埃罗替尼、退热净、阿莫西林、头孢克罗、布洛芬)对检测结果均无影响。

　　申请人采用临床样本对核酸提取试剂盒进行了性能研究，根据与该产品的组合性能研究结果，确定核酸提取试剂符合检测需求。

　　(四)阳性判断值研究

　　阳性判断值的建立：选取441 例NSCLCFFPE样本(用于基因融合检测)和695 例NSCLCFFPE样本(用于基因突变检测)，使用本试剂盒进行检测，分别统计融合反应管FAM和突变反应管FAM/ROX通道Ct值，并计算突变管FAM/ROX通道ΔCt值，通过受试者工作特征(ROC)曲线确定本产品的阳性判断值。再用 320例临床样本对阳性判断值进行验证。最终确定阳性判断值见表5~6。

　　表5 LET 反应条A(LETA)FAM 信号结果判定

LET 反应条A	①	⑤*	⑥*	⑦	⑧
	ALK	ROS1	ROS1	MET	RET
阳性区域	Ct<30	Ct<30	Ct<30	Ct<27	Ct<30
阴性区域	Ct≥30或NoCt	Ct≥30或NoCt	Ct≥30或NoCt	Ct≥27或NoCt	Ct≥30 或NoCt

*：⑤和⑥管中任意一管Ct<30时，则判读为ROS1 基因融合阳性，否则判读为ROS1基因融合阴性。

　　表6 LET 反应条B(LET B)FAM/ROX 信号结果判定

LET反应条B			①	②	③	⑤
FAM信号	阳性A区	突变Ct值	Ct＜30	Ct＜30	Ct＜30	/
	阳性B区	突变Ct值	30≤Ct＜33	30≤Ct＜33	30≤Ct＜33	/
		ΔCtCut-off值	10	8	8	/
	阴性	突变Ct值	Ct≥33 或NoCt	Ct≥33 或NoCt	Ct≥33 或NoCt	/
ROX信号	阳性A区	突变Ct值	Ct＜30	Ct＜30	Ct＜30	Ct＜29
	阳性B区	突变Ct值	30≤Ct＜33	30≤Ct＜33	30≤Ct＜33	29≤Ct＜32
		ΔCtCut-off值	8	9	9	9
	阴性	突变Ct值	Ct≥33 或NoCt	Ct≥33 或NoCt	Ct≥33 或NoCt	Ct≥32 或NoCt

　　(五)稳定性研究

　　申请人对产品的实时稳定性、运输稳定性、开瓶冻融稳定性和样本稳定性进行了系统的研究，确定了在各种条件下申报产品及样本的有效保存时间。

　　实时稳定性研究中，将3批试剂盒储存于规定储存条件下，分别在不同储存时间对物理性能、准确度、特异性、检测限和精密度进行考察，各项性能指标均符合要求，确定产品在20 ±5℃条件下，可稳定保存6 个月。

　　此外，申请人对产品的开瓶冻融稳定性、运输稳定性和样本稳定性分别进行了研究。结果显示，产品性能均能满足产品说明书声称。

三、临床评价概述

　　申请人在北京肿瘤医院、山西省肿瘤医院、福建医科大学附属协和医院和哈尔滨医科大学附属肿瘤医院共4家临床机构完成了临床检测性能的试验，同时通过桥接试验或同步开发的方式完成了伴随诊断意义的研究。本次临床试验分为如下七部分。

　　第一部分：采用试验体外诊断试剂与实验室参考方法(二代测序)进行对比试验，评价试验体外诊断试剂的临床检测性能。

　　针对该部分研究，入组病例以非小细胞肺癌患者为主(包括腺癌、鳞癌、腺鳞癌和大细胞癌)，样本类型为FFPE样本。临床试验纳入统计受试者共 862例。其中，EGFR基因共检出阳性例数457例(包括G719S突变阳性24例、G719A突变阳性26 例、G719C突变阳性26 例、19del突变阳性195 例、S768I突变阳性61 例、T790M突变阳性75例、L858R突变阳性 135例、L861Q突变阳性62 例);ALK基因融合阳性106 例;ROS1基因融合阳性 87例;MET基因 14号外显子跳跃突变阳性 91例。

　　试验结果显示：EGFR基因突变检测结果，阳性符合率99.6%(95%CI：98.4%，99.9%)，阴性符合率100%(95%CI：99.1%，100.0%);ALK基因融合检测结果，阳性符合率98.1%(95%CI：93.3%，99.5%)，阴性符合率 99.6%(95%CI：98.8%，99.9%);ROS1基因融合检测结果，阳性符合率 100%(95%CI：95.6%，100%)，阴性符合率99.6%(95%CI：98.9%，99.9%);MET基因14 号外显子跳跃突变检测结果，阳性符合率96.8%(95%CI：91.0%，98.9%)，阴性符合率100%(95%CI：99.5%，100%)。

　　针对KRAS基因 G12C突变，临床试验纳入统计受试者共312 例。其中KRAS基因 G12C突变阳性79 例。试验结果显示，KRAS基因 G12C 突变检测结果，阳性符合率 100%(95%CI：95.4%，100%)，阴性符合率99.6%(95%CI：97.6%，99.9%)。

　　针对RET基因融合，临床试验纳入统计受试者共345 例。其中RET基因融合阳性93例。试验结果显示，RET基因融合检测结果，阳性符合率100%(95%CI：96.0%，100%)，阴性符合率99.6%(95%CI：97.8%，99.9%)。

　　第二部分：采用试验体外诊断试剂与原研伴随诊断试剂进行比较研究，评价试验体外诊断试剂对于盐酸厄洛替尼片、甲磺酸奥希替尼片和克唑替尼胶囊的伴随诊断性能。

　　针对该部分研究，采用本产品与原研伴随诊断试剂进行一致性研究。入组病例均为非小细胞肺癌患者，主要是药物临床试验适应症人群，样本类型为 FFPE样本。其中，EGFR基因突变检测共纳入有效样本341 例，其中19del阳性样本79 例，EGFR L858R阳性样本112 例，T790M阳性样本72 例;ALK 基因融合检测纳入有效样本 328 例，阳性98 例;ROS1 基因融合检测纳入统计分析的有效样本 312 例，阳性84 例。

　　试验结果显示：EGFR基因突变检测结果，阳性符合率100%(95%CI：98.1%，100.00%)，阴性符合率 99.3%(95%CI：96.3%，99.9%) ;ALK 基因融合检测结果，阳性符合率100%(95%CI：96.2%，100%)，阴性符合率99.1%(95%CI：96.9%，99.8%);ROS1 基因融合检测结果，阳性符合率100%(95%CI：95.6%，100%)，阴性符合率100%(95%CI：98.3%，100%)。

　　第三部分：采用桥接研究，评价试验体外诊断试剂对于盐酸特泊替尼片的伴随诊断性能。

　　针对该部分研究，采用本产品与CTA进行一致性研究，共入组药物临床试验中病例的416例样本，样本类型为FFPE样本。其中阳性样本 138例，阴性样本278例。试验结果显示：试验体外诊断试剂与CTA的阳性符合率为99.3%(95%CI：96.0%，100.00%)，阴性符合率98.2%(95%CI：95.8%，99.4%)。

　　另外，针对药物临床试验纳入的208 例MET基因14号外显子跳跃突变阳性的 FFPE组织样本，本次桥接试验纳入132例，试验体外诊断试剂检测阳性的为 131例。对于药物临床试验中的主要评价指标，上述 131个样本来源病例的客观缓解率(ORR)为 53.4%(95%CI：44.5%，62.2%)，与药物临床试验结果基本一致;对于药物临床试验中的其他次要评价指标也进行了充分评价，结果显示，上述 131 个病例的次要评价指标的结果也与药物临床试验中结果基本一致;同时，针对需要进行敏感性和插补分析的情况也进行了分析。

　　第四部分：采用桥接研究，评价试验体外诊断试剂对于谷美替尼片的伴随诊断性能。

　　针对该部分研究，采用本产品与CTA进行一致性研究，共入组药物临床试验中病例的217 例样本，其中阳性样本123 例，阴性样本94 例，样本类型为FFPE样本。试验结果显示：试验用体外诊断试剂与CTA的阳性符合率为100%(95%CI：96.9%，100.00%)，阴性符合率100%(95%CI：96.1%，100%)。

　　另外，针对药物临床试验纳入的79 例MET基因14号外显子跳跃突变阳性的FFPE组织样本，本次桥接试验纳入69 例，试验体外诊断试剂检测阳性的为69 例。对于药物临床试验中的主要评价指标，上述69 个样本来源病例的客观缓解率(ORR)为65.2%(95%CI：52.8%，76.3%)，与药物临床试验结果基本一致;对于药物临床试验中的其他次要评价指标也进行了充分评价，结果显示，上述69 个病例的次要评价指标的结果也与药物临床试验中结果基本一致;同时，针对需要进行插补分析的情况也进行了分析。

　　第五部分：采用与抗肿瘤药物同步开发的方式，评价试验体外诊断试剂对于枸橼酸戈来雷塞片的伴随诊断性能。

　　申请人提供了JAB-21822-1002 IIb期关键研究药物临床研究资料。该临床试验是评价枸橼酸戈来雷塞片单药治疗既往经治的KRASG12C突变的局部晚期或转移性非小细胞肺癌患者有效性和安全性的开放性、单臂的Ⅱb 期临床研究。在这项临床试验中，共有 117例经中心实验室采用试验体外诊断试剂检测到KRASG12C突变的NSCLC受试者纳入了有效性统计分析。多中心临床试验结果显示，FAS人群确认的客观缓解率(ORR)49.6%(95% CI：40.2%，59.0%)，中位缓解持续时间14.5 个月(95% CI：9.6，NE)，中位至缓解时间 1.41个月(最大值9.8个月，最小值1.2 个月)，中位无进展生存期8.2 个月(95% CI：5.2，11.1)。

　　第六部分：采用与抗肿瘤药物同步开发的方式，评价试验体外诊断试剂对于格索雷塞片的伴随诊断性能。

　　申请人提供了D1553-102关键研究药物临床研究资料。该临床试验是一项开放、单臂、多中心关键性Ⅱ期研究，评估该药物在KRASG12C突变阳性的局部晚期或转移性非小细胞肺癌患者中的疗效和安全性。在这项临床试验中，共有 119例经中心实验室采用试验体外诊断试剂检测到KRASG12C突变的NSCLC受试者纳入了有效性统计分析。多中心临床试验结果显示：LAS人群客观缓解率52.0%(95%CI：42.8%，61.1%)，中位缓解持续时间12.45 个月(95%CI：8.28，NE)，6 个月的缓解持续率78.4%(95% CI：65.1%，87.1%)。

　　第七部分：采用桥接研究，评价试验体外诊断试剂对于塞普替尼胶囊的伴随诊断性能。

　　针对该部分研究，采用本产品与CTA进行一致性研究，共入组药物临床试验中病例的163例样本，样本类型为FFPE样本。其中阳性样本 160例，阴性样本3例，另外补充阴性样本 153例。试验结果显示：试验体外诊断试剂与CTA的阳性符合率为95.83%(95%CI：91.15%，98.46%)，阴性符合率100.00%(95%CI：97.65%，100.00%)。

　　另外，针对药物临床试验LIBRETTO-321纳入的26 例RET基因融合阳性的FFPE组织样本，本次桥接试验纳入26 例，试验体外诊断试剂检测阳性的为25 例。对于药物临床试验中的主要评价指标，上述25 个样本来源病例的客观缓解率(ORR)为68.0%(95%CI：46.5%，85.1%)，与药物临床试验结果基本一致;针对药物临床试验LIBRETTO-431纳入的212 例RET基因融合阳性的FFPE组织样本，本次桥接试验纳入109 例，试验体外诊断试剂检测阳性的为93 例。对于药物临床试验中的主要评价指标PFS，中位PFS尚未达到，上述93 个样本来源病例的风险比(HR)为0.320，与药物临床试验结果基本一致;对于药物临床试验中的其他次要评价指标也进行了充分评价，结果显示，上述病例的次要评价指标的结果也与药物临床试验中结果基本一致;同时，针对需要进行敏感性和插补分析的情况也进行了分析。

　　综上所述，该产品临床试验设计符合《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》的相关要求。临床试验结果显示该产品临床性能满足临床要求。

四、产品受益风险判定

　　根据GB/T 42062-2022《医疗器械-风险管理对医疗器械的应用》对产品进行风险分析。

　　(一)受益评估

　　本试剂盒用于体外定性检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)样本DNA/RNA中人类EGFR、KRAS、ALK、ROS1、RET基因突变和MET基因14号外显子跳跃突变，具体突变位点信息详见产品说明书。其中EGFR基因19号外显子缺失突变和L858R突变可用于盐酸厄洛替尼片和甲磺酸奥希替尼片的伴随诊断;EGFR基因T790M突变可用于甲磺酸奥希替尼片的伴随诊断;ALK基因融合和ROS1基因融合可用于克唑替尼胶囊的伴随诊断;MET基因外显子14跳跃突变可用于谷美替尼片和盐酸特泊替尼片的伴随诊断;KRAS基因G12C突变可用于枸橼酸戈来雷塞片和格索雷塞片的伴随诊断;RET基因融合可用于塞普替尼胶囊的伴随诊断。

　　本产品临床应用的主要受益在于：可以作为盐酸厄洛替尼片、甲磺酸奥希替尼片、克唑替尼胶囊、谷美替尼片、盐酸特泊替尼片、枸橼酸戈来雷塞片、格索雷塞片以及塞普替尼胶囊的伴随诊断试剂对靶向用药人群进行筛选，从而让NSCLC患者获得及时的治疗。

　　(二)风险评估

　　申请人对已知危险(源)进行风险评价，按照风险可接受准则判断每个危险(源)的风险是否达到可接受水平，对合理可降低的风险、不经过风险/收益分析即判定为不可接受的风险采取控制措施，并对具体措施实施验证，同时重新对采取措施后的风险进行估计，确认其风险水平是否可接受。但为保证用械安全，基于对主要剩余风险的规避，需要在说明书中提示以下信息：

　　1.本试剂盒检测结果仅供临床参考，不应作为患者个体化治疗的唯一依据，临床医生应结合患者病情、药物适应症、治疗反应及其它实验室检测指标等因素对检测结果进行综合判断。

　　2.警示及注意事项：产品说明中介绍了该产品检验方法的局限性及使用中的注意事项。