脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）检测试剂盒体外诊断试剂产品注册技术审评报告（雷德生物科技）

一、产品概述

　　(一)产品主要组成成分

名称	型号规格			主要成分
	50测试/盒	100测试/盒	200测试/盒
LAM 磁珠包被物	1×6 mL/瓶	1×11 mL/瓶	1×21 mL/瓶	兔单克隆LAM捕获抗体包被的磁珠
LAM 发光标记物	1×4 mL/瓶	1×7 mL/瓶	1×12 mL/瓶	吖啶酯标记的兔单克隆LAM 检测抗体
LAM辅助试剂	1×4 mL/瓶	1×7 mL/瓶	1×12 mL/瓶	含0.1% Tween-20的PBS缓冲液
LAM 校准品Ⅰ	1管（复溶后为8 U/mL）	1管（复溶后为8 U/mL）	1管（复溶后为8 U/mL）	天然结核分枝杆菌LAM 抗原冻干粉
LAM 校准品聂	1管（复溶后为2000 U/mL）	1管（复溶后为2000 U/mL）	1管（复溶后为2000 U/mL）	天然结核分枝杆菌LAM 抗原冻干粉
LAM 质控品I	1管（复溶后为20 U/mL）	1管（复溶后为20 U/mL）	1管（复溶后为20 U/mL）	天然结核分枝杆菌LAM 抗原冻干粉
LAM 质控品II	1管（复溶后为1000 U/mL）	1管（复溶后为1000 U/mL）	1管（复溶后为1000 U/mL）	天然结核分枝杆菌LAM 抗原冻干粉
LAM溶解液	1×70 mL/瓶	1×70 mL/瓶	1×70 mL/瓶	含0.1% BSA的PBS缓冲液
LAM 样本稀释液	1×20 mL/瓶	1×30 mL/瓶	1×50 mL/瓶	含0.1% Tween-20的PBS缓冲液

　　(二)产品预期用途

　　本产品用于体外定性检测人尿液样本中的脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)。

　　本产品用于结核病的辅助诊断。

　　(三)产品包装规格

　　50测试/盒，100测试/盒，200测试/盒。

　　(四)产品检验原理

　　本产品采用双抗体夹心联合吖啶酯直接化学发光免疫分析法，检测人尿液中LAM含量。待测样本中的LAM与包被在磁珠上的兔单克隆LAM捕获抗体结合，形成磁珠-抗体-抗原复合物，然后与吖啶酯标记的兔单克隆LAM检测抗体结合，形成磁珠-抗体-抗原-抗体-吖啶酯的免疫复合物，经磁分离洗涤后，将预激发液和激发液加入到反应混合物中，化学发光免疫分析仪测定相应的发光强度，通过建立校准曲线可计算样本中的LAM含量。

二、临床前研究概述

　　(一)主要原材料

　　1.主要原材料的选择

　　本产品的主要原材料包括：兔抗-LAM-包被抗体、兔抗-LAM-标记抗体、脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)抗原、吖啶酯、磁珠等。兔抗-LAM-包被抗体、兔抗-LAM-标记抗体由申请人生产制备，其他主要原材料均购自外部供应商。申请人通过功能性试验等，筛选出最佳原材料和供应商，制定了各主要原材料的质量标准并经检验合格。

　　2.企业参考品的设置

　　企业参考品组成如下表：

名称	样本 类型	浓度	备注
阳性参考品	尿液	≥0.4 U/mL	15份临床确诊结核患者（包含肺外结核患者）尿液样本
阴性参考品	尿液	<0.4 U/mL	15 份健康者和其他易混淆疾病患者（包含NTM 患者）尿液样本
最低检出限参考品	尿液	S1 ：(2.0±0.2) U/mL	3 份临床确诊结核患者尿液样本和1 份健康者尿液样本
		S2 ：(1.0±0.1) U/mL
		S3 ：(0.4±0.06) U/mL
		S4 ：(0.2±0.03) U/mL
线性参考品	尿液	0.1~1000 U/mL	临床确诊结核患者高值尿液样本和健康者尿液样本
精密度参考品R1	尿液	100 U/mL	临床确诊结核患者高值尿液样本和健康者尿液样本

精密度参考品R2	尿液	1 U/mL	临床确诊结核患者高值尿液样本和健康者尿液样本
准确度参考品A1	尿液	100 U/mL	临床确诊结核患者高值尿液样本和健康者尿液样本
准确度参考品A2	尿液	0.4 U/mL	临床确诊结核患者高值尿液样本和健康者尿液样本

　　(二)生产工艺及反应体系研究

　　申请人通过对试剂主要生产工艺的研究，包括磁珠稀释液和磁珠包被物制备、发光标记物稀释液和发光标记物制备、辅助试剂、样本稀释液、校准品溶解液、校准品和质控品制备及冻干工艺等，确定了最佳生产工艺。

　　申请人通过对试剂反应体系的研究，包括样本加入体积、磁珠包被物加入体积、LAM发光标记物与LAM辅助试剂加入体积、孵育时间、洗涤次数、样本采集对于病程、症状以及用药影响、样本前处理等，最终确定了最佳反应体系。

　　(三)分析性能评估

　　本产品分析性能评估内容主要包括准确度、精密度、检出限、分析特异性、高剂量钩状效应、测量区间、包容性等研究。

　　1.准确度研究中，申请人使用三批成品试剂盒在不同仪器检测准确度参考品和 LAM参考物质，检测结果相对偏差均在±15%以内。

　　2. 精密度研究中，申请人用三批成品试剂盒检测了阴性尿液样本、LAM弱阳性样本、LAM中等阳性样本和重复性参考品，评估了批次内/间、试验日内/间、试验轮次内/间、操作者间、仪器间、实验室间的精密度。结果显示，三批试剂盒的批内、批间精密度检测结果的 CV均小于15%;三批成品试剂盒在不同仪器上检测重复性参考品，检测结果均为阳性。

　　3. 检出限研究中，申请人用三批成品试剂盒在不同仪器检测空白样本和低浓度样本建立空白限和检出限，计算出空白限为不高于0.1 U/mL，检出限为不高于0.2 U/mL。然后对空白限和检出限进行验证，最终确定本试剂盒的空白限为不高于 0.1U/mL，检出限为不高于0.2 U/mL。

　　4. 分析特异性研究中，申请人进行了交叉反应研究和干扰物质研究。

　　在交叉反应研究中，使用三批次试剂盒检测35 例常见非结核分枝杆菌感染患者样本，包含堪萨斯分枝杆菌、鸟分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、胞内分枝杆菌、偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌。其中32 例检测结果为阴性，1 例堪萨斯分枝杆菌、1 例鸟分枝杆菌、1 例胞内分枝杆菌检测结果阳性，与试剂盒有交叉反应。使用三批次试剂盒检测30 例其他病原体临床样本，链球菌肺炎、隐球菌肺炎、人流感病毒(A 型、B 型)、铜绿假单胞菌肺炎、麻风样本的检测结果均为阴性。使用三批次试剂盒检测添加菌种样本，龟分枝杆菌、偶发分枝杆菌、耻垢分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、草分枝杆菌在 1×103~6CFU/mL时检测结果均为阴性。其中堪萨斯分枝杆菌和鸟分枝杆菌在1×104~6CFU/mL时，土地加分枝杆菌、次要分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、胞内分枝杆菌、胃分枝杆菌、海分枝杆菌、溃疡分枝杆菌、戈登分枝杆菌、蟾蜍分枝杆菌在1×103~6CFU/mL时检测结果为阳性，与试剂盒有交叉反应。使用三批次试剂盒检测添加病原体样本，肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、大肠杆菌、表皮葡萄球菌、隐球菌、人流感病毒(A型、B 型)、诺卡氏菌、绿脓杆菌、白色念珠菌、人类副流感病毒(1型、2型、3型)在 1×103~6CFU/mL时检测结果均为阴性。其中金黄色葡萄球菌在1×103CFU/mL时检测结果为阳性，与试剂盒有交叉反应。使用三批次试剂盒检测添加结构类似物样本，甘露糖苷、脂甘露聚糖、荚膜多糖的检测结果均为阴性，与试剂盒无交叉反应。

　　在干扰试验中，使用三批试剂盒检测干扰物质，外源性药物异烟肼90 mg/L、利福平90 mg/L、卡那霉素300 mg/L、阿莫西林50mg/L、盐酸异丙肾上腺素25ng/mL、莫匹罗星100 μg/mL、乙胺丁醇50 mg/L、吡嗪酰胺200 mg/L、链霉素300 mg/L、扎那米韦130 ng/mL、地塞米松50 mg/L、乙醇0.1 g/mL、咖啡因120μg/mL，对本试剂盒的检测无影响;尿潜血、总蛋白、脂肪、尿胆红素、尿液白细胞、红细胞、尿酮体、尿胆原、亚硝酸盐、葡萄糖、细菌、真菌、尿比重和pH异常样本，对试剂的检测无影响。本试剂盒检测脂蛋白异常人群、合并糖尿病的结核病人群以及注射卡介苗人群样本，对本试剂盒检测结果无影响。

　　5.高剂量钩状效应研究中，申请人用三批成品试剂盒在不同仪器检测高浓度尿液样本，检测结果未出现明显下降趋势，结果为LAM含量低于120000 U/mL时未发生HOOK效应。

　　6.测量区间研究中，申请人用三批成品试剂盒在不同仪器检测高浓度尿液样本和低浓度尿液样本，经过建立和验证研究得出测量区间为0.1~1000 U/mL。

　　7. 包容性研究中，申请人用三批成品试剂盒检测结核分枝杆菌、牛结核分枝杆菌和非洲分枝杆菌样本，检测结果均符合要求。

　　(四)阳性判断值研究

　　申请人采用ROC曲线法确定阳性判断值。申请人采用申报产品对280例临床尿液样本进行检测(包含结核患者 110例，

　　非结核患者有170 例，其中肺非结核分枝杆菌病NTM 有35例)，通过结果的统计分析，确定了本产品的阳性判断值为0.4 U/mL。

　　申请人选取73例结核患者样本和87例非结核患者样本进行阳性判断值的验证，结果表明本产品阳性判断值设置合理。

　　(五)稳定性研究

　　申请人对本产品的实时稳定性、运输稳定性、使用稳定性和样本稳定性进行了研究，确定了在各种条件下本产品及样本的有效保存时间。

　　实时稳定性：三批试剂盒储存于2～8ºC 条件下，分别于保存的第0、6、12、15、18、21 个月时，对试剂盒的全套企业参考品进行检测，结果均符合要求，试剂盒的效期稳定性为2~8℃保存，有效期为18 个月。

　　还对产品的运输稳定性、使用稳定性和样本稳定性分别进行了研究，结果表明，产品的性能均满足产品说明书的声称。

三、临床评价概述

　　申请人在河南省传染病医院(郑州市第六人民医院)、杭州市红十字会医院、南宁市第四人民医院共 3家机构完成了临床试验。采用试验体外诊断试剂与临床参考标准/实验室参考方法进行比较研究，确认本产品的临床性能。入组样本为具有结核病相关体征/症状的疑似结核病患者或其他易混淆疾病患者的

　　样本，样本类型为尿液样本，共计1001 例，包括肺结核患者422例，肺外结核患者75 例，非结核患者504 例。

　　针对试验体外诊断试剂与临床参考标准的比较研究，入组结核病病例497例，非结核病病例504例。试验结果显示，本产品与临床参考标准比较时的临床灵敏度为 66.2%(95%Cl:61.93%，70.22%)，临床特异度为 94.25%(95%Cl: 91.86%，95.96%)。

　　同时，比较了试验体外诊断试剂与临床诊疗过程中常规使用检测方法的临床性能。结果显示，针对同一批病例，试验体外诊断试剂的临床灵敏度为67.01%，临床特异度为92.91%;涂片的临床灵敏度为42.27%，临床特异度为87.23%;培养鉴定的临床灵敏度为48.95%，临床特异度为97.78%;其他已批准结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂的临床灵敏度为50.52%，临床特异度为100%;针对临床诊疗过程中常规使用检测方法检测为阴性的部分病例，试验体外诊断试剂均有一定程度的检出，显示试验体外诊断试剂对于其他检测方法具有一定的补充作用。

　　针对试验体外诊断试剂与实验室参考方法的比对研究，共纳入422例疑似结核病感染的病例，尿液阳性样本 157例，阴性样本 265例，试验体外诊断试剂与实验室参考方法对于临床样本检测的阳性符合率为93.63%(95%Cl: 88.67%，96.50%)，

　　阴性符合率为95.85%(95%Cl: 92.72%，97.67%)。

　　综上所述，临床试验结果显示试验体外诊断试剂与临床参考标准和实验室参考方法比较均具有较好的一致性，满足技术审评要求。

四、产品受益风险判定

　　依据 YY/T0316-2016《医疗器械风险管理对医疗器械的应用》，对该产品进行风险分析。

　　(一)受益分析

　　本产品用于体外定性检测人尿液样本中的脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)。

　　结核病的传统诊断方法包括：涂片镜检、培养鉴定和分子生物学检测等，本产品定性检测人尿液样本中的脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)，用于结核病的辅助诊断，可为结核病的辅助诊断提供一种新的方法。

　　(二)风险评估

　　申请人对已知危险(源)进行风险评价，按照风险可接受准则判断每个危险(源)的风险是否达到可接受水平，对合理可行降低的风险、不经过风险/收益分析既判定为不可接受的风险采取控制措施，并对具体措施进行实施验证，同时重新对采取措施后的风险进行估计，确认其风险水平是否可接受。

　　为保证用械安全，基于产品风险评估，需要在说明书中提示以下信息：

　　1.与预期用途有关的风险。例如：

　　本产品用于体外定性检测人尿液样本中的脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)。用于结核病的辅助诊断。检测结果仅供临床参考，不应用作诊断决策的唯一依据。

　　2. 警示及注意事项:产品说明书中介绍了该产品检验方法的局限性及使用中的注意事项。