NTRK1/NTRK2/NTRK3基因融合检测试剂盒创新医疗器械注册技术审评报告-2025年南京世和版

　　本产品是NTRK1/NTRK2/NTRK3基因融合检测试剂盒(可逆末端终止测序法)，属于第三类体外诊断试剂，由南京世和医疗器械有限公司申请注册。该试剂盒用于定性检测实体瘤患者福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织样本中的NTRK1、NTRK2和NTRK3基因融合变异，作为NTRK抑制剂恩曲替尼的伴随诊断工具。检测结果需结合临床其他信息综合判定，不应作为唯一决策依据。

　　产品概述

　　产品主要组成成分如下：

组分编号	组分名称	主要组成成分
B1	PCA修复缓冲液	Mg²⁺、Tris、dNTP
E1	PCA修复反应液	DNA聚合酶、多核苷酸激酶
E2	PCA连接酶	DNA连接酶
B2	PCA连接缓冲液	PEG6000、Mg²⁺、Tris
A1	PCA通用接头	寡核苷酸
IP01-IP12	PCA文库扩增引物1-12	寡核苷酸
IP01-IP24	PCA文库扩增引物1-24	寡核苷酸
IP01-IP36	PCA文库扩增引物1-36	寡核苷酸
E3	PCA PCR扩增反应液	DNA聚合酶
P1	PCA富集扩增引物	寡核苷酸
P2	PCA富集探针	寡核苷酸
B3	PCA DNA封闭液	寡核苷酸
S1	PCA封闭序列	寡核苷酸
B4	PCA杂交缓冲液1	四甲基氯化铵
B5	PCA杂交缓冲液2	甲酰胺
W1	PCA清洗缓冲液1	十二烷基硫酸钠
W2	PCA清洗缓冲液2	柠檬酸钠
W3	PCA清洗缓冲液3	柠檬酸钠
W4	PCA清洗缓冲液4	乙二胺四乙酸
BW	PCA磁珠清洗液	柠檬酸钠
MB	PCA磁珠	M270链霉亲和素磁珠
NC	PCA阴性对照品	健康人细胞系DNA
PC	PCA阳性对照品	健康人细胞系DNA、TPM3-NTRK1融合细胞系DNA和NTRK2野生型质粒、QKI-NTRK2融合质粒、NTRK3野生型质粒、ETV6-NTRK3融合质粒

　　注：同一组分不同批号不能混用;PCA为Pan-Cancer缩写。

　　产品包装规格包括12人份/盒、24人份/盒和36人份/盒。

　　产品检验原理基于DNA探针捕获技术：从FFPE样本提取核酸DNA后，通过片段化、加接头和PCR扩增制备文库，再使用特异性DNA探针杂交捕获目标区域(包括外显子和内含子区域)，经磁珠富集后，进行高通量测序，并通过生物信息学软件分析变异。试剂盒含阴/阳性对照品，用于质控。

　　临床前研究概述

　　主要原材料为外购，包括富集探针、酶类、磁珠等，经供应商筛选和质量控制。企业参考品设置如下：

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　　阳性参考品：2份，含NTRK1/NTRK2/NTRK3不同融合类型和丰度样本。

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　　阴性参考品：1份，无变异样本。

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　　最低检测限参考品：1份，含检出限水平融合样本。

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　　重复性参考品：3份，包括阳性和阴性参考品。

　　生产工艺和反应体系经优化，确定最佳条件。分析性能评估结果如下：

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　　准确性：与全外显子组测序对比，阳性符合率和阴性符合率均为100%。

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　　最低检测限：肿瘤细胞含量≥20%时，50ng DNA中融合变异频率低至2%。

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　　精密度：批次内/间、不同操作者、仪器和实验室间精密度良好。

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　　分析特异性：无交叉反应;干扰物如福尔马林、血红蛋白等无影响。

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　　肿瘤细胞含量：≥10%可检出，建议≥20%。

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　　核酸提取：配套试剂符合要求。

　　阳性判断值通过ROC曲线法确定：嵌合reads数≥4为阳性。

　　稳定性研究表明，产品在-20℃±5℃(磁珠2~8℃)下有效期10个月，运输和使用稳定性符合要求。

　　临床评价概述

　　临床试验在7家机构开展，共纳入2422例FFPE样本，其中NTRK融合阳性101例。与全外显子组测序对比结果：

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　　阳性符合率：98.02%(95%CI:93.07%,99.46%)。

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　　阴性符合率：99.74%(95%CI:99.44%,99.88%)。

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　　总符合率：99.67%(95%CI:99.35%,99.83%)。

　　桥接试验针对恩曲替尼伴随诊断，纳入67例阳性样本和157例阴性样本，与CTA(对比方法)结果：

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　　阳性符合率：92.54%(95%CI:83.69%,96.77%)。

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　　阴性符合率：99.36%(95%CI:96.48%,99.89%)。

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　　总符合率：97.32%(95%CI:94.28%,98.77%)。

　　桥接病例客观缓解率(ORR)为71.0%，与药物临床试验一致。

　　产品受益风险判定

　　受益：作为恩曲替尼伴随诊断，筛选用药人群，使患者及时治疗。

　　风险评估：检测结果受样本来源、操作等因素影响，说明书已提示局限性，如样本要求、污染风险等。剩余风险防控措施包括明确预期用途和注意事项。

　　综合评价意见

　　产品符合医疗器械法规要求，安全性、有效性达标，建议准予注册。